标题：AF594 Ethyl NHS Ester

一、化学试剂的基本信息

保存条件：避光、-20°C储存，避免反复冻融

溶解性：溶于DMSO、DMF等有机溶剂

英文名称：AF594 Ethyl NHS Ester ，Alexa Fluor594 Ethyl NHS Ester

中文名称：AF594叠氮

分子式：C51H67N5O13S2

分子量：1022.23

规格标准：该试剂的纯度通常达到95%以上，规格包括1g、5g、10g等，也可按需包装。

生产商信息：陕西新研博美生物科技有限公司

二、基本定义

AF594 Ethyl NHS Ester是一种水溶性红色荧光标记试剂，属于磺化罗丹明衍生物。

其核心结构包含：

荧光发色团（AF594）：

激发波长（Ex）约590 nm，发射波长（Em）约617 nm（橙红色荧光），量子产率高达0.77。

磺化基团赋予其良好的水溶性，避免标记后生物分子聚集。

反应基团（NHS Ester）：

乙基修饰的N-羟基琥珀酰亚胺酯。

结构中的NHS酯基团可与伯胺共价结合。

核心特性：

光稳定性：长时间曝光不易光漂白，优于传统染料。

pH稳定性：在pH 4–10范围内荧光不受影响，适用于生理环境。

纯度：≥95%，需避光干燥保存（-20℃），溶解后立即使用。

三、标准操作流程

（一）标记蛋白质/抗体

储备液配制

染料储备液：取1 mg AF594 Ethyl NHS Ester溶于无水DMSO，配成1–10 mM溶液。

蛋白储备液：目标蛋白溶于pH 8.3–8.5的0.1–0.2 M碳酸氢钠缓冲液，浓度≥2 mg/mL。

偶联反应

摩尔比：染料:蛋白 = 10:1–50:1。

缓冲液：pH 7.2–8.0磷酸盐或碳酸盐缓冲液。

条件：室温避光反应1–2小时，或4℃过夜 。

关键控制：pH 7.4时NHS酯半衰期仅15分钟，操作需快速 。

纯化与验证

纯化方法：使用Sephadex G-25凝胶柱层析或透析去除游离染料 。

标记效率验证：

测定595 nm处荧光强度及蛋白浓度。

理想标记率：3–8个染料分子/蛋白 。

（二）标记氨基修饰核酸

步骤与蛋白标记类似，但需调整：

缓冲液：pH 8.5–9.0的硼酸盐缓冲液 。

反应时间：室温避光孵育2小时 。

（三）细胞/组织标记

样品预处理：

固定：4%多聚甲醛；通透：0.1% Triton X-100。

染色：

将标记后的蛋白加入样品，避光孵育30–60分钟 。

洗涤：PBS冲洗3次去除未结合染料 。

成像：

荧光显微镜：激发滤片590±15 nm，发射滤片615±20 nm。

四、新研博美目录列表：

QSY21 NHS

304014-13-9

DY520XL-TSA.TEA

DY520XL-tyramide.TEA

Alexa Fluor 647 COOH

ATTO Rho12琥珀酰亚胺酯

TAMRA amine,5-isomer

Biotin-PEG24-NHS Ester

Acid-C2-PEG3-NHS Ester

6-FAM, SE，6-FAM NHS Ester

TAMRA-tyramide，TAMRA-TSA

4'-AZIDO-2,2':6',2''-TERPYRIDINE

Biotin-4-Fluorescein，FITC-4-Biotin

5-FAM alkyne，FAM alkyne，5-isomer

5-FITC-Tetrazine，Fluorescein-Tetrazine

温馨提示：

试剂仅用于科研实验，不可用于人体~~~~~编辑作者：陕西新研博美生物科技有限公司木南