5-Carboxyfluorescein Diacetate, Acetoxymethyl Ester（124412-00-6）使用方法与注意事项
一、 基本信息
中文名称：5-羧基荧光素二乙酸酯-AM（或双乙酰-5-羧基荧光素AM酯）
英文名称：5-Carboxyfluorescein Diacetate, Acetoxymethyl Ester（简称5-CFDA, AM）
CAS号：124412-00-6
分子式：C₂₈H₂₀O₁₁
分子量：532.45
外观：白色至类白色固体
纯度：通常≥95%（HPLC检测）
溶解性：可溶于DMSO、DMF等有机溶剂，部分产品可溶于乙醇或PBS缓冲液（需现配现用）
二、 化学结构与特性
1.结构特点：5-CFDA, AM由羧基荧光素（CF）与两个乙酰氧基甲基酯（AM）基团偶联而成。AM基团可增强分子膜渗透性，CF部分提供荧光信号。
2.荧光特性：
激发波长（Ex）：485
发射波长（Em）：515
荧光颜色：绿色（与FITC相似）
3.稳定性：AM基团可保护CF在细胞外不发光，进入细胞后被酯酶水解，释放荧光CF。
三、工作原理与应用
1.细胞渗透性：AM基团使分子可穿透细胞膜，无需转染试剂或电穿孔。
2.酶解激活：进入细胞后，AM基团被胞内酯酶水解，释放CF，CF因带负电荷而滞留于细胞内。
3.应用领域：
细胞活性检测：通过荧光强度评估细胞存活率、代谢活性或增殖能力
膜完整性研究：CF在完整细胞内积累，膜损伤时荧光外泄，可用于毒性测试或凋亡研究。
酶活性测定：作为酯酶底物，研究相关酶的功能或抑制剂筛选。
细胞示踪：标记细胞后观察迁移、分化或相互作用。
四、使用方法与注意事项
1.操作步骤：
储存液配制：用DMSO溶解（如10 mM），分装后-20℃避光保存。
工作液稀释：用无血清培养基或PBS稀释至1–10 μM。
细胞孵育：加入工作液，37℃孵育15–30分钟。
洗涤与检测：离心去上清，PBS洗涤后用荧光显微镜或流式细胞仪检测。
2.注意事项：
避光操作：荧光分子对光敏感，需全程避光。
浓度优化：根据细胞类型调整工作液浓度，避免过高浓度导致毒性。
现配现用：工作液建议当天使用，避免反复冻融。
安全防护：佩戴实验服、手套和护目镜，DMSO有毒性。
五、优势
膜渗透性高：无需转染，操作简便。
荧光信号强：CF荧光量子产率高，背景干扰低。
多用途：适用于多种细胞类型和研究场景。
六、替代产品与相关试剂
5-Carboxyfluorescein-MAL
FITC-Phenylboronic Acid，荧光素异硫氰酸酯苯硼酸
5-FITC-PEG3-Amine，Fluorescein-PEG3-NH2
1807539-04-3
FAM amine,6-isomer，6-FAM-NH2
2183440-42-6
Lotus Tetragonolobus Lectin (Fluorescein)，莲花凝集素-荧光素
5-FAM amine HCl
2183440-41-5
HEX NHS ester, 6-isomer
2129651-79-0
以上由陕西新研博美生物科技WWH编辑