Polyethylenimine Linear (PEI) MW25000
线性PEI转染试剂 MW25000

产品简介:
Polyethylenimine Linear(PEI)溶液是由一种阳离子聚合物转染试剂,结构可以写成是-(CH2CH2NH)n-,PEI 能将DNA包裹成带正电荷的微粒,这些微粒可以黏合到带有负电荷的细胞表面残基,并通过胞吞作用进入细胞。一旦进入细胞,胺的质子化导致反离子大量涌入以及渗透势降低,在低 pH环境中实现 DNA胞内释放。PEI上未质子化的胺可以在与膜结合的细胞器(如溶酶体)中吸收氢离子,这将导致更多氢离子的流入,诱发渗透溶胀。而质子化胺之间的排斥引起PEI构象的改变,上述变化导致的渗透膨胀使囊泡释放聚合物与DNA形成的复合物进入细胞质。复合物拆解后,DNA能自由的融合到细胞核中。
应用最广泛的主要有PEI 25000与 PEI 40000(也有称 PEIMAX),对大多数培养细胞都有较高的转染效率(用于常见细胞系,如HEK-293、HEK293T、HepG2、Hela、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3 和 Sf9 等),并且细胞毒性较低。。PEI 40000与PEI 25000 转染试剂相比,具有很多优点。两者区别: 1) PEI 25000转染溶液通常需要几个小时才能制备,PEI 25000含有 4-11%的残余丙酰基,可防止聚合物主链与DNA强烈结合。2) PEI 40000完全水解(完全去乙酰化的结构意味着每批产品的表现始终如),可以在两个小时内转化为即用型溶液。3)PEI 40000 比PEI 25000更易于使用,并且更高效,含更长连续性乙烯亚胺片段,其质子化氮水平比PEI 25000提高11%以上。
本品是PEI 25K的无菌溶液,浓度为1mg/ml,直接使用即可。
保存条件:
粉末室温保存,2年有效。
溶液-20℃保存,1年有效。
产品使用(以6孔板为例)
1. 细胞铺板
提前一天将细胞种植在六孔板中,以转染时细胞密度在 70%~80%为宜。
2. 转染过程
1) 在转染前2h,移除细胞上原有的培养基,换为新鲜的完全培养基。
2) 将2ug质粒DNA用100uL无血清稀释液稀释,充分混匀制成DNA稀释液。
注意:无血清稀释液建议采用Opti-MEM或ddH2O。
3) 向DNA 稀释液中直接加入4uL转染试剂,室温静置10~15min。转染复合物配制完成。
4) 将转染复合物加入细胞培养基中,轻柔混匀。
5) 继续培养24~48h,收取细胞进行鉴定或加入相应抗生素筛选稳定克隆。
6) 使用本产品转染后一般在24h开始进入表达高峰期,36~48h达到表达高峰,相对于脂质体转染试剂,达到峰值的时间延后约6~12h。
不同细胞培养容器转染用量:

不同细胞系参考数据 (以 6 孔板为例)(数据仅供参考)

线性 PEI 溶液的配制方法:
下面分别推荐一种简单适用而高效的方法,讲述如何配制浓度为1mg/mL的转染试剂的配制。
提前准备器材:
1L玻璃烧杯、1L玻璃量筒、pH计、移液器、磁力搅拌棒、带油管的真空泵、1g的PEI 25000或者1g的 PEI 40000、IL 纯水(Milli-Q@纯水,注射用水(WFI),或类似的生物级水)、1N 氢氧化钠、25mL 无菌塑料吸管、一次性 0.1μm, 0.2um, 0.22μm PES真空无菌过滤器、
无菌高聚乙烯或聚丙烯试剂瓶。
配制过程:
1g的PEI 25000→900mL水溶解→搅拌、加热(60-80°C)→加HCl调pH到2.0 左右→盖上烧杯,搅拌3h(直至粉末完全溶解)→冷却至室温→加NaOH调pH到6.9-7.1→移液到量筒,加水补足至1L→真空过滤消毒→分装,-20°C 保存。
1g的 PEI 40000→900mL水→溶解搅拌、加热(60-80°C)→加1N NaOH调pH到6.9-7.1→移液到量筒,加水补足至1L→真空过滤消毒→分装,4°C保存。
注意:加热或加酸都有助于PEI 溶解(特别是配制PEI 25000,只加热溶解不了,需要适当加酸的),详细用量可试加一点搅拌看看,足够溶解就行,不一定需要加到pH那么低。
转染液贮存和保存期:
分装存放在无菌高聚乙烯或聚丙烯试剂瓶中
PEI 25000溶液可在-20°C保存长达一年,部分解冻的溶液可在4°C 保存2周,不可反复冻融。
PEI 40000转染溶液在4°C可保持其性能至少6个月效果最佳,稳定存放此溶液可能适用一年。不可反复冻融。
注意事项:
1. 本品为无菌溶液,请操作过程中执行无菌操作。
2. 本产品对细胞非常温和,一般情况下转染后无需进行换液操作。
3. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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